Office National de Sécurité Sanitaire des Produits Alimentaires (ONSSA)
المملكة المغربية
المكتب الوطني للسلامة الصحية للمنتجات الغذائية
CONCOURS DE RECRUTEMENT : ADMINISTRATEUR DEUXIEME GRADE
OPTION : BIOLOGIE MOLECULAIRE
ÉPREUVE ÉCRITE — SESSION DU 23-02-2025
Coefficient : 02 — Durée : 3 heures
Structure du barème : Exercice I : 4 pts | Exercice II : 3 pts | Exercice III : 6 pts | Exercice IV : 7 pts
Consignes à lire impérativement :
- Cette épreuve se décompose en 4 exercices répartis sur 7 pages.
- Les différentes parties sont indépendantes les unes des autres, vous pouvez répondre dans l’ordre qui vous convient.
- Aucun autre matériel électronique (téléphone portable, tablette…) n’est autorisé.
- Il sera tenu compte de la présentation, de la concision des réponses et du respect des consignes.
- Les feuilles de brouillon ne seront pas notées.
Exercice I (4 points)
Pour chacune des questions posées, une ou plusieurs réponses exactes sont proposées. Indiquez les bonnes réponses sur votre copie.
1. Les nucléotides et leurs constituants :
- [ ] A. L’adénine est un nucléotide à base purique
- [ ] B. L’acide thymidylique est un nucléotide à ribose
- [ ] C. La guanosine est un nucléoside à base purique
- [ ] D. L’acide désoxycytidylique est un nucléotide de l’ADN
- [ ] E. L’uridine ne contient pas de phosphate
2. Dans une molécule d’ARN :
- [ ] A. La quantité de la base cytosine est égale à la quantité de base uracile
- [ ] B. La quantité de la base adénine est égale à la quantité de base uracile
- [ ] C. La quantité de la base guanine est égale à la quantité de base cytosine
- [ ] D. La quantité de la base uracile est égale à la quantité de base cytosine
- [ ] E. Les quantités des quatre bases cytosine, adénine, guanine et uracile sont différentes
3. Structure de l’acide nucléique :
- [ ] A. Dans un acide nucléique, la liaison entre nucléotides est une liaison phosphodiester
- [ ] B. L’extrémité 3′ libre d’un acide nucléique contient un groupement phosphate
- [ ] C. Dans un acide nucléique, chaque nucléotide contient une fonction acide restée libre d’où son nom d’acide
- [ ] D. La fonction OH libre en 3′ d’un acide nucléique est portée par la base
- [ ] E. Un acide nucléique circulaire n’a pas d’extrémités 5′ et 3′
4. La réplication de l’ADN chez les eucaryotes :
- [ ] A. Est un processus rapide
- [ ] B. Intervient au cours de la phase G1 du cycle cellulaire
- [ ] C. Est dite semi-conservative
- [ ] D. Copie les brins matrices en brins complémentaires
- [ ] E. Commence au niveau de séquences spécifiques, appelées ORC, riches en nucléotides A et G
5. La réplication de l’ADN est contrôlée par un système enzymatique hautement spécifique, on peut citer :
- [ ] A. Les ADN polymérases
- [ ] B. Les nucléases
- [ ] C. Les ligases
- [ ] D. Les topoisomérases
- [ ] E. L’hélicase
6. La transcription des gènes consiste au passage de :
- [ ] A. ARN à ADN
- [ ] B. ADN à ARNm
- [ ] C. ARN à ARN
- [ ] D. ADN à ADN
- [ ] E. ADN à ARNr
7. Un gène comporte :
- [ ] A. Des exons et des introns
- [ ] B. La boîte TATAAA
- [ ] C. Le TFII D
- [ ] D. Des codons stop
- [ ] E. Des extrémités traduites
8. Le passage de l’ARN à l’ADN est appelé :
- [ ] A. La traduction inverse ou reverse-traduction (RT)
- [ ] B. La transcription inverse ou reverse-transcription (RT)
- [ ] C. L’acétylation
9. L’enzyme Taq polymérase ajoute les nucléotides dans le sens :
- [ ] A. 5’OH vers 3’P
- [ ] B. 3’OH vers 5’P
- [ ] C. 5’P vers 3’OH
10. Quelles sont les composantes d’une courbe d’amplification PCR en temps réel standard ?
- [ ] A. Phase linéaire
- [ ] B. Phase ligne de base
- [ ] C. Phase de plateau
- [ ] D. Phase exponentielle
- [ ] E. Phase ligne seuil
- [ ] F. Phase de bruit de fond
11. La dégradation des Acides nucléiques et la présence des facteurs d’inhibition peuvent induire des résultats :
- [ ] A. Faux positifs
- [ ] B. Faux négatifs
12. L’utilisation des gants et leur changement fréquent sont recommandés pour protéger les ARNs :
- [ ] A. Des RNase présentes sur la peau et les poussières
- [ ] B. Des DNase présentes sur la peau
13. La présence d’inter-contamination engendre des résultats :
- [ ] A. Faux positifs
- [ ] B. Faux négatifs
14. Le risque de la contamination croisée est maîtrisé par :
- [ ] A. Travail sous PSM pour les pathogènes aérogènes
- [ ] B. Utilisation d’embout à usage unique pour chaque échantillon et chaque réactif
- [ ] C. Utilisation de témoin négatif d’extraction
- [ ] D. Utilisation des embouts avec filtre
- [ ] E. Ouverture et fermeture successives de chaque tube
- [ ] F. Pipetage des réactifs dans des fractions aliquotes
15. Quelles sont les exigences que l’agencement des locaux pour les analyses PCR doit respecter ?
- [ ] A. Minimiser les risques de contamination des échantillons à analyser.
- [ ] B. Agencement logique des locaux en fonction de l’activité du laboratoire.
- [ ] C. Définition du risque de contamination propre au laboratoire.
- [ ] D. Séparation physique des zones (pièces ou postes de travail).
- [ ] E. Partage de certaines zones avec d’autres activités si le risque de contamination est maîtrisé.
16. Que doit-on maîtriser pour éviter les contaminations dans les locaux de biologie moléculaire ?
- [ ] A. Flux de personnel
- [ ] B. Flux d’air
- [ ] C. Flux des documents
- [ ] D. Flux des réactifs
- [ ] E. Flux du matériel
- [ ] F. Flux des amplicons
- [ ] G. Flux des déchets
Exercice II (3 points)
Questions de cours : Répondez de manière concise et précise aux questions suivantes :
- Quelle enzyme est responsable de la transcription et comment fonctionne-t-elle ?
- Quelle est la différence entre la PCR conventionnelle, la PCR en temps réel (qPCR) et la RT-PCR ?
- Pourquoi faut-il utiliser des contrôles positifs et négatifs dans une réaction PCR ?
- Quels sont les moyens de maîtrise des facteurs d’inhibition et de dégradation des ARN dans un laboratoire de biologie moléculaire ?
- Qu’est-ce que le séquençage Sanger et comment fonctionne-t-elle ?
- Quelle est l’importance des bases de données génétiques, comme GenBank et les ressources du NCBI, dans la biologie moléculaire et en bio-informatique ?
- Comment la biologie moléculaire peut-elle être utilisée pour lutter contre les épidémies virales ?
- À l’aide d’un schéma, décrire les étapes de la PCR temps réel avec sonde de type TaqMan.
Exercice III (6 points)
Vous disposez d’un gène d’environ 450 pb que vous souhaitez amplifier intégralement par PCR à l’aide des amorces suivantes :
- Amorce 1 : 5′-GAGAAGGGTGGTGGTTTTCTGTG-3′
- Amorce 2 : 5′-GGTGTAGTGGTTAGCACTCTGG-3′
- Calculez la température de fusion (Tm) de ces amorces.
- Décrivez les conditions d’amplification d’une séquence (températures des différents paliers, durées approximatives des différentes étapes, nombre de cycles) que vous allez programmer sur votre thermocycleur pour réaliser l’amplification, ainsi que l’objectif de chaque étape.
-
Afin d’étudier précisément le comportement de vos amorces, vous réalisez des amplifications dans 5 conditions différentes en faisant varier la valeur de la température d’hybridation d’amorce : 52°C, 55°C, 58°C, 61°C et 64°C. Vous soumettez ensuite les produits d’amplification à une migration sur gel d’agarose à 1,5 %, et vous obtenez le profil suivant :
E T 52°C 55°C 58°C 61°C 64°C E 500 > ▬▬ ▬▬▬ ▬▬▬ ▬▬▬ ▬▬▬ ▬▬▬ ▬▬ 400 > ▬▬ ▬▬ 300 > ▬▬ ▬▬ ▬▬ 200 > ▬▬ ▰ ▬▬ 100 > ▬▬ ▰ ⬮ ⬮ ▰Figure : Électrophorèse sur gel d’agarose à 1,5 %.
E : échelle de poids moléculaire (tailles en pb). T : échantillon témoin négatif (réaction de PCR réalisée en présence de tous les composants nécessaires, sauf l’ADN matrice).Question : Interprétez la présence ou l’absence de bandes sur le gel d’agarose en fonction des différentes températures d’hybridation testées. Discutez également de la spécificité de l’amplification et de l’intensité des bandes obtenues.
- Pour confirmer que la bande majoritaire (environ 450 pb) correspond bien à la séquence spécifique recherchée, un séquençage Sanger a été réalisé. Le résultat indique une séquence d’environ 400 pb. Décrivez brièvement comment vous analyseriez cette séquence afin de vérifier qu’elle correspond bien à la séquence cible envisagée.
Exercice IV (7 points)
Nous souhaitons répliquer une molécule d’ADN linéaire double brin, notée A, dont la séquence est la suivante :
brin 2 : 3′-TTAAGCCTAT…………GACGTAATCG-5′
On dispose de 4 Amorces dont les séquences sont :
- Amorce 1 : 5′-GCTAATGC-3′
- Amorce 2 : 5′-TCCGAATT-3′
- Amorce 3 : 5′-AATTCGGA-3′
- Amorce 4 : 5′-GCATTAGC-3′
Dans une première étape, l’ADN est chauffé à 90°C en présence d’un large excès de deux de ces amorces, puis le mélange est refroidi.
- Quel couple d’amorces allez-vous choisir parmi les 4 cités ci-dessus pour permettre la réplication de cet ADN ? Justifier votre réponse à l’aide de schémas.
- Après avoir choisi le couple d’amorces permettant la réplication de l’ADN, nous disposons d’une concentration de départ de 100 μM pour ce couple d’amorces. Nous souhaitons finalement obtenir une concentration de 200 nM dans un volume final de 25 μL, en réalisant auparavant une dilution au 1/20. Combien de microlitres de ce couple d’amorces devez-vous prélever pour obtenir exactement 200 nM dans le mélange final ?
- Décrire les phénomènes physico-chimiques qui peuvent se produire dans ces conditions, à 90°C et au cours du refroidissement.
- Que faut-il ajouter au mélange pour qu’il y ait réplication ?
- Quel est le premier nucléotide incorporé lors de la réplication du brin 1 ?
Dans une 2ème étape, on ajoute au milieu réactionnel les réactifs permettant la réplication.
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